Easicult Combi 使用说明
    Easicult Combi 设计应用于不同工业作业中的微生物污染检测。浸片可以应用于现场直接检测,也可以作为样本的接种载体来使用。
    浸片的一面浇注有TTC琼脂(淡黄色),用于大多数普通细菌的培养。浸片的另一面浇注有玫瑰红钠琼脂培养基(粉红色),用于霉菌和酵母菌的培养。
    测试的主要意义在于提高微生物的检出率,能够检测到所有的微生物。
注意事项
    不要使用过期的检测浸片;
    不要接触未使用过的浸片培养基;
    如果你发现下列情况请不要使用该浸片:
        1、培养基变色或脱水
        2、培养基从塑料载片上脱落下来
        3、浸片上有微生物生长
    不要接触已经使用过的浸片,因为任何在Easicult Combi 浸片上生长的微生物都有可能是致病的。
存放
    Easicult Combi 浸片管宜在室温下(大约20℃左右)存放,避免通风和光照,避免存放地点温度波动过大,不允许被冰冻。保质期打印在包装盒上以及每支浸片管的盖子上。
操作步骤
    为了避免污染,除了被检测材料,浸片培养基不允许接触任何其它材料。另一方面,浸片培养基与被测材料的充分接触非常重要。
黏性液体或细菌含量高的液体(>107CFU/ml)
    如果被测材料黏性大或者细菌含量很高中细菌,样本需要进行稀释。取100ml或1000ml可饮用的自来水到清洁干净的、干燥的并且带盖子的瓶子里,用于稀释。用于稀释的水含量不能超过100CFU/ml。在把水灌到瓶子之前,需要先打开水笼头,放出5分钟左右时间的流水;或者把水煮沸15分钟,然后冷却。使用一根清洁的吸管,吸取1ml 的样本到瓶子里,盖上瓶盖,震荡瓶子30次左右使样本混合均匀。然后把浸片浸入到液体中,按照液体采样步骤进行操作。
液体采样
1、打开管子或放回浸片时,不允许碰触浸片的琼脂培养基表面。
2、把浸片浸入到液体中,也可以把浸片放在液体水流下冲湿,或者把液体喷在浸片上。 如果液体处于压力状况下,需要小心操作浸片,以避免浸片上的培养基在液压下被冲落。如果样品放在容器内,需要混匀样品,然后浸入浸片。 浸片的两面必须完全湿润,并与被检测的液体接触5—10秒钟。
3、让浸片上多余的液体流掉。可以在浸片底端放置一张干净的吸水纸,用于吸掉多余的液体。
4、采样完成后,把浸片放回培养管中并旋紧。在标签上写好标记,贴于管壁上。
5、浸片在27-30℃温度下培养24-48小时,用于细菌的检测。检测酵母菌和霉菌需要培养3天才能读取结果。如果在室温下培养,分别需要培养2-4天和4-7天。
结果分析
    培养后,把浸片小心地从培养管中旋出,使用标准模板对比浸片培养基上的菌落密度判断菌落数。注意TTC培养基板和玫瑰红钠培养基板的模板是不同的。如果样本被稀释过,稀释因素在结果判断时必须考虑进去。比如:样本的稀释情况是1ml原材料加入到100ml水中,出来的菌落浓度结果是106 CFU/ml,那么样本的菌落浓度实际是108 CFU/ml。
玫瑰红钠琼脂培养基---检测真菌
    生长在玫瑰红钠琼脂培养基上的菌落可能是单一的霉菌或是单一的酵母菌,或者是两钟菌落混合生长。霉菌菌落比较柔软,毛茸茸的,通常是苍白色、青色或者黑色。酵母菌菌落通常是圆顶状的,但是有时候也可能比较平坦、干燥,它们的颜色一般是苍白色或者是红色的。

    由于霉菌菌落可能是由霉菌菌丝体的断片或着是单个的孢子生长而成,所以模板不能用于进行定量。但是可以对污染的程度进行判定,轻度污染(+),中等程度污染(++),严重污染(+++)。如果需要,菌落也可以从浸片培养基上挑出来在显微镜下进行观察。霉菌污染有时候也可以用裸眼在液体表面进行观察。

TTC培养基---检测菌落总数
    大多数需氧菌在 TTC培养基上生长成红色菌落。霉菌和酵母菌也可以在该培养基上缓慢生长。即使几乎所有细菌生长都会形成红色菌落,但是任何无色的菌落在进行菌落密度判断时也必须要考虑进去。有些情况下可以会出现一些的大菌落,必须记住判断的是菌落密度,而不是单个菌落的尺寸。

    如果细菌含量非常高(超过107CFU/ml),会出现菌落融合生长的情况,呈现出均匀的红色表面层的形态。出现整个表面无色菌落生长的情况是非常稀少的,为了避免误判,建议把呈现均匀表面形态的浸片与未使用过的浸片进行比较。

    由于没有通用的适用标准存在,样本的限值不得不取决于经验。对于冷却液而言,可以参考下面的建议值:

细菌
CFU/ml 污染  
<104 轻度   使用没问题
104—106 中度  
>106 重度   不可接受
方法的局限性
如果样本的细菌含量超过107CFU/ml,或者黏度很高,样本需要进行稀释;
非常稀少的细菌有可能会在TTC培养基上形成无色的菌落;
浸片用于细菌检测,可靠的检测下限为103CFU/ml;
一些球状细菌的生长可能会受到培养基中TTC成分的影响。
处理
    任何生长在浸片培养基上的微生物都有可能是致病的,因此必须对使用过的浸片进行处理,燃烧,或者打开管子后进行高压灭菌,或用合适的消毒剂浸泡过夜。